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紫外分光光度計(jì)測(cè)BSA濃度曲線(xiàn)時(shí)注意事項(xiàng)
發(fā)布日期：2017-03-21 瀏覽次數(shù)：5878
BSA即為牛血清白蛋白，在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用。BSA濃度可根據(jù)紫外分光光度計(jì)由曲線(xiàn)測(cè)得，到底是怎么一回事呢？
紫外分光光度計(jì)測(cè)量蛋白濃度常可用經(jīng)典公式：
蛋白的濃度（mg/ml）=1.4280-0.74A260；
也可同時(shí)讀取一系列倍比稀釋的已知蛋白含量的標(biāo)準(zhǔn)液的光密度值，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，后換算出濃度。
紫外分光光度計(jì)測(cè)試需注意的是：
1.用于儀器調(diào)零的液體與待測(cè)樣品一致，標(biāo)準(zhǔn)蛋白也要使用同樣的溶液；
2.光密度值應(yīng)該在0.1-0.8之間；
3.要求蛋白質(zhì)溶液*透明；
4.對(duì)含量很低的蛋白質(zhì)溶液可使用215/225nm的波長(zhǎng)測(cè)定；
5.使用蛋白質(zhì)濃度范圍為0.1-1.0mg/ml。
配制濃度約為10mg/ml的BSA溶液，然后按一定倍數(shù)稀釋?zhuān)恋蜐舛葹?.017mg/ml，用紫外分光光度計(jì)測(cè)試這一系列的BSA溶液的吸光度，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)測(cè)量結(jié)果而知，用紫外分光光度計(jì)測(cè)試牛血清白蛋白（BSA）的濃度，濃度太高曲線(xiàn)將逐漸平緩，而在0.02-2.0mg/ml濃度之間，基本能呈現(xiàn)出較好的線(xiàn)性。
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